一株抗香蕉枯萎病DSE菌株的筛选鉴定及抗病机理初探

　　摘 要 通过平皿和盆栽共生对抗法，筛选到1株对香蕉枯萎病具有防治作用的深色有隔内生真菌L-14，2种方法的防效分别达到72.4%和56.5%，接种该菌株可显着提高香蕉幼苗的鲜重。形态观察和28S rDNA序列比对分析结果表明，该菌株为裂壳菌（Schizothecium sp.）。使用该菌株浸根处理接种香蕉苗后，植株系列抗氧化保护酶如苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）及超氧化物歧化酶（SOD）的活性均显着高于对照，而菌株L-14与香蕉枯萎病菌混合接种处理样品的PPO和SOD活性显着高于单独接种处理，表明接种该生防菌能增强香蕉的抗氧化防护系统，提高其对香蕉枯萎病的抗性。
　　关键词 裂壳菌；深色有隔内生真菌；香蕉枯萎病；生物防治
　　中图分类号 S436.681 文献标识码 A
　　Abstract A dark septate endophytic（DSE）fungus L-14 was screened for further activity among the ten DSEs. The disease control efficacies of L-14 against the Fusarium wilt was found up to 72.4% in the culture dish and 56.5% in the

pot culture method. After inoculation of this strain into the banana seedling， the fresh weight of banana seedlings significantly increased over the control plant. Morphological observation and 28S rDNA sequence alignment analysis showed that the strain belonged to the genus Schizothecium. After inoculation of L-14 with banana seedlings， the antioxidant enzymes such as phenylalanine ammonia lyase（PAL）， peroxidase（POD）， polyphenol oxidase（PPO）and superoxide dismutase（SOD）were significantly higher over the control. The activity of PPO and SOD was found to be higher in case of mix inoculation of L-14 strain and banana Fusarium wilt disease pathogen. The results suggested that DSE strain L-14 could improve the resistance to banana Fusarium wilt disease of the seedling by triggering the over expression of antioxidative defense system.
　　Key words Schizothecium sp.； dark septate endophytes； banana Fusarium wilt disease； biological control
　　doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.03.027
　　香蕉枯萎病又称香蕉巴拿马病、黄叶病、凋萎病，是制约香蕉生产的一种毁灭性土传病害。该病由镰刀菌属尖孢镰刀菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）侵染引起[1-2]，近年来对华南蕉区的为害日趋扩大。至今尚无有效防治香蕉枯萎病的药剂，抗病香蕉品种又无法达到产量的要求[3-4]。生物防治作为防治香蕉枯萎病的措施之一，具有良好的发展和应用前景，国内外学者对此开展了不少研究，已报道的具有应用前景的防治微生物包括真菌、细菌和放线菌等。柯仿钢等[5]研究发现通过连续施用木霉菌株gz-2菌剂对香蕉枯萎病的防治效率可达74.4%；石妞妞等[3]于接种香蕉枯萎病菌前4 d和前2 d，施用枯草芽孢杆菌T122F，对香蕉枯萎病防效可达66%。茹祥等[6]分离到2株对香蕉枯萎病有较好防治效果的放线菌DL-24和DL-28，盆栽平均防效分别达76.5%和83.6%，田间防效为67.5%和47.5%。尽管香蕉枯萎病防治微生物资源的收集筛选研究已经广泛开展，但因田间环境因素复杂，适用于大规模田间应用的微生物资源依然很少。
　　深色有隔内生真菌（Dark Septate Endophyte， DSE）是一类能与寄主植物互惠共生的微生物，其定殖宿主具有非专一性，且在逆境环境中，DSE也分布广泛[7-8]。DSE能够定殖于宿主体内形成互惠共生体，相比其它完全暴露在根际土壤中的生防微生物，受到环境的影响相对较小，可能在田间应用中更容易获得稳定良好的防治效果。本研究通过平皿和盆栽共生对抗法，对香蕉枯萎病生防DSE菌株进行筛选，由形态观察和28S rDNA序列分析，对生防菌株进行鉴定。通过测定香蕉植株系列抗氧化保护酶如苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化，探索生防菌防治香蕉枯萎病的机理，为进一步开发利用生防菌株提供理论基础。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　香蕉组培苗：桂蕉6号（广西植物组培苗有限公司提供）；DSE菌株：由本实验室从甘蔗根围分离保存，共10株（编号分别为L-1、C29-7-2、L-14、B-1、G-X、C23-5-1、G、N3、EWM和M-1）；香蕉枯萎病病原菌：镰刀菌4号生理小种（FOC4）。